bca试剂盒测蛋白浓度（BCA试剂盒测定蛋白质浓度）

BCA试剂盒测定蛋白质浓度

BCA试剂盒是测定蛋白质浓度的一种常用试剂盒。本文将介绍这种试剂盒的原理、步骤以及常见问题和注意事项。

原理

BCA试剂盒的原理是基于巴氏试剂对还原型香豆酸（BCA）的还原反应。还原型香豆酸与蛋白质中的蛋白质酰基和氨基酸中的蛋白质酰胺反应，生成紫色产物。产物的光吸收值（OD）与反应终点浓度成正比。因此，通过测定OD值，我们可以确定蛋白质的浓度。

步骤

BCA试剂盒的测定步骤如下：

1. 将待测样品加入96孔板中（典型体积是10-20微升），制备浓度序列的蛋白质标准品，并将其加入另外的孔中。注意，蛋白质标准品需要覆盖整个要测的浓度范围。如果你不确定浓度范围，可以从高到低尝试不同的标准品。在操作过程中，自己也可以尝试产生标准曲线。通常情况下，我们会取一些常见的蛋白质标准品，如牛血清白蛋白、卵清蛋白等。
2. 将BCA试剂盒的试剂A和试剂B混合，并等待20分钟使其在室温下稳定。
3. 将试剂混合液添加到样品孔和标准品孔中，混合充分。
4. 将孔板放入板托中，并读取OD值。建议选择800-850nm的光谱。

注意事项和常见问题

下面我们将列出一些注意事项和常见问题：

• 和纯度较高的蛋白质浓度较低的样品进行测量时，样品应该稀释，避免样品中总蛋白质的浓度超过标准品的浓度。
• 蛋白质标准品应当在每次测定前重新制备。
• 如果获得的OD值过低或过高，可以尝试将测定范围扩大或缩小。
• 试剂A和试剂B的比例也是需要调整的。过度添加试剂B会导致结果偏高，因此密切注意该比例。
• 注意混合液摇匀。

总之，BCA试剂盒能够快速、准确地测定蛋白质的浓度。然而，它的主要缺点是对于其他成分的影响不够明确，例如：存在一些碰巧具有还原性的杂质，这些杂质可能会影响还原型香豆酸和BCA试剂的反应。但由于其相对简单性和广泛使用，BCA仍然是众多生物和化学研究中的蛋白质浓度测定方法之一。