使用BCA试剂盒测定蛋白浓度

概述

BCA试剂盒是一种非常常用的测定蛋白质浓度的试剂盒。它是利用一种化学底物在还原环境下和蛋白质中的蛋白质-巯基反应，形成紫色化合物。紫色化合物的颜色与蛋白质的浓度成正比。BCA试剂盒的优点主要包括对常见的蛋白质有良好的灵敏度和线性响应、对各种样品稳定性和兼容性良好、易于操作和处理等方面。本文将详细介绍BCA试剂盒的使用方法。

实验操作

1. 样品制备 将需要检测的蛋白质样品制备成适当的浓度，以便得到合适的吸光度值。 一般建议样品浓度应在20-200 μg/ml范围内。 2. 制定标准曲线 BCA试剂盒的标准曲线及其浓度范围之间的线性关系直接影响样品蛋白质浓度的测定范围。一般标准曲线采用的是常见的蛋白质，如牛血清白蛋白，浓度范围一般是在0-2000 μg/ml之间。通过制作标准曲线和检测样品测定浓度。 3. 开始测定 将标准品和样品分别加入到96孔板的不同孔中，加入BCA试剂盒，混合后加热反应一定的时间。通常情况下，加热时间约为30min，温度约为37℃。反应结束后，读取孔板内的吸光度。

施加注意事项

1. 样品制备应遵循标准操作流程，尽量不要加入可能影响测定结果的物质，比如设计检测的溶液中不能有甘氨酸，糖，还原型物质等等 2. 在试剂盒的保存期限内使用 3. 各步操作要操作严格按照操作手册上的要求来，不能省略任何操作 4. 检测前将试剂盒均匀摇匀，以免分散不均 5. 每个孔的液体不能相互混合，使用吸头或者其他工具注意去除液体表面的泡沫，以获得比较准确的结果

总结

BCA试剂盒是非常常用的测定蛋白质浓度的试剂盒，具有稳定性好，精度高，操作简便等优点。在实验操作中，应严格遵循操作手册的操作规范，减少操作误差，从而得到准确的测定结果。